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反式作用丁型肝炎病毒核酶体外切割活性的研究

放大字体  缩小字体 发布日期:2021-05-29 05:10:25 来源: 作者:用户63792    浏览次数:0    
摘要

干扰的,聚化抑制的活性。证据明,0入添参与813,介导的信号传导,而该信号可促进多种革巴基因的转录。因此与转录共抑制分子1的相互作用提1可能也参与了对即13,介导的信号传导的负调控作用。鉴于分子转录抑制功能和813130介导的信号传导在机体内的重要作用,对0人添与分子相互作用的生理学意义值得址行深入研允。 3刘,金伯泉,刘飞。种新的即130结合分子的序列分析和真核4刘答,金伯泉。gpl30结合分子...

干扰的,聚化抑制的活性。证据明,0入添参与813,介导的信号传导,而该信号可促进多种革巴基因的转录。因此与转录共抑制分子1的相互作用提1可能也参与了对即13,介导的信号传导的负调控作用。鉴于分子转录抑制功能和813130介导的信号传导在机体内的重要作用,对0人添与分子相互作用的生理学意义值得址行深入研允。

3刘,金伯泉,刘飞。种新的即130结合分子的序列分析和真核4刘答,金伯泉。gpl30结合分子抑制JAK激酶与gP130的结合。单6刘飞刘1金伯泉,等。,遵1出队稳定转染的朋1细胞系的建立与鉴定。免疫学杂志,2,瓜163179182.

8刘飞,刘签,金伯泉,等。;施,融合蛋白的达与抗体制备。细胞与分子免疫学杂志,1998,1413338.

反式作用丁型肝炎病毒核酶体外切割活性的研究潘光锦韩金样!型肝炎病毒汨爪在复制过程中,基因组及复制产生的抗基因组胃均具有自我裂解的活性核酶拙,夺爪活性。0核酶是在所发现的核酶类型中唯在人体的细胞中具有天然裂解活性的核酶。通过对0核酶的研宄。己经确定了85世长度的核酶活性区。并且其级结构也有了阐明本文根据山沪丁等人拈出的入,核醒我裂解,的假结样如十级结构。将5的,核酶从其。12连接处分成两段。段作为柃酶。段作为底物,设计,核酶的反式作用形式;将反式作用,核酶的基因重组入载体。根据核酶的结构。采用化学合成的方法进行基因的合成。将整个基因分两段合成其间为互补粘端,两侧基金项目山东省自然科学基金资助项目院山东省医药生物技术研宄中心分别为1和83,1站端,先利用激心将化学六成的核酶寡柃佳酸进行5末端磷酸化。将它们等摩尔混匀后。置9021缓慢冷却至室温使其退火形成双链。将其重组入质粒,14,将屯组有核基闪的质粒8,切割完全线性化后,采用丁7奶转录酶进行核酶的体外转录。转录时加入痕的标记的转录完毕后。利用含7爪,1尿素的聚丙烯酰胺凝胶纯化核酶。以同样方法制备核酶的切割底物将核酶与底物分别定量后,各取定量0.05如,儿的底物及过量的0.核酶置于切割反应体系中置2后。置555,在切割体系中加入,12至终浓度胃心总体积20.置37,水浴进行切割反应。分别在反应的01530,60时取出定量的反应混合物加入等量的电泳上样缓叫201.含71.。以戒的聚丙烯胺凝胶电泳,放射自显影鉴定。同时切下放射形条带用液闪计数议9800,测定放射条带的放射性。估算切割百分率叩押+呼,14.

温浴60,时的切割百分率为60.改变反应体系的由值发现,核酶具有活性法求得反式作用1核酶的值为0.

Hm柃酶圮唯被发现在人体的细胞中具有切割活性的核酶类型。设计具有活性的反式作用1核酶用于反义治疗有着其独特的优势。在利用短基因重组技术将反式核酶的基因定向重组入载体并体外转录后。发现它对底物册人能进行反式切割,由此。我们可以看到核酶进,反式叻贤的可行性汴可进步探讨其对来源于其他病毒的职片段叻贤的可忻性。阐明,核酶作为反义治疗工具的应用前景。

 
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