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愈伤组织切割法快速繁殖安祖花研究

放大字体  缩小字体 发布日期:2021-04-18 13:15:01 来源: 作者:用户46461    浏览次数:3    
摘要

花:虫、大叶花烛、水晶花烛、观叶花烛、火鹤等,为天南星科红掌属,原产中南美洲的热带雨林1,为多年生常绿草本植物,其花序为肉穗花序,具红色、粉红色、白色及五彩色的蜡纸佛焰苞,是一种观花观叶两者兼宜的观赏花卉,花朵鲜艳夺目,是热带观花类的代表;叶片有天鹅绒的金属光泽,又是相当珍贵的观叶植物。安祖花的繁殖一般以分株繁殖为主,偶尔也用扦插等方法繁殖,但速度很慢3,目前国外主要是用组织培养法进行繁殖4,'国...

花:虫、大叶花烛、水晶花烛、观叶花烛、火鹤等,为天南星科红掌属,原产中南美洲的热带雨林1,为多年生常绿草本植物,其花序为肉穗花序,具红色、粉红色、白色及五彩色的蜡纸佛焰苞,是一种观花观叶两者兼宜的观赏花卉,花朵鲜艳夺目,是热带观花类的代表;叶片有天鹅绒的金属光泽,又是相当珍贵的观叶植物。安祖花的繁殖一般以分株繁殖为主,偶尔也用扦插等方法繁殖,但速度很慢3,目前国外主要是用组织培养法进行繁殖4,'国内的种苗也主要是来自国外的组培苗,为了满足安祖花的市场需求,国内许多学者对其快繁进行了大研究8.研究在此基础上,力过*简便、*稳定的组培快繁殖方法,为实现大规模工厂化生产奠定基础。除此之外,该决繁体系的建立为农杆菌介导的基因转化提供了前提条件,如抗病、抗虫、改变叶色花色12等基因的转化有可能成为现实。

1材料安祖花来自本室组培苗,接种于MS+ 1培养基中,培养条件均为温度24*C~26*C、光照强度40Lmol/m2/s、12h/12h光暗交替,45d继代一次。

2试验方法21愈伤组织获得切取带一对叶的安祖花茎尖,在MS+ IBA0.1上诱导愈伤,45d后供实验用。

22愈伤组织不同切割方式对其殖和芽分化的影响杉随大小一致的愈伤组织,切掉表层己分化的部第:刘石泉(196SO),男,副教授,硕士,研究方向为植物基金项目:湖南省高等学校科学研究资助项目(06C218)。

分,分不切割、切割成Q5cm 0.1cm大小的片状、切割成糊状三种情况,分别接种于MS+6~BA1.0+IBA0.1中,培养45d后统计其愈伤组织的重和芽的分化数(实验重复3次)。

2.3IBA对根分化的影响2中大小一致的芽(带三片叶)接种于1/2MS+IBA(0,0.5,1.0,1.5,2.0)中,蔗糖浓度为3%,每个梯度每次接种10棵芽,培养45d后统计结果(重复3次)。2.4蔗糖对根分化的影响2中大小一致的芽接种于1/2MS+IBA0.5中,改变蔗糖浓度(0%、1%、3%、5%、7%),每个梯度每次接种10棵芽,培养45d后统计结果(重复3次)。

2.5生根苗的移栽4中生根苗揭开覆膜纸,放于组培外环境下(同1)3d后,洗净根部残留琼脂,移到含水苔为基质的花盆中,覆上保鲜膜室内环境7d后揭去保鲜膜,移出室外,一个月后统计其成活率。

3结果与讨论3.1愈伤组织不同切割方式对其殖和芽分化的影响对愈伤组织只切割表层,不再分割培养,7d后表层开始膨大,颜色浅绿色>约14d后有的分化成芽,芽基部局部带红色;切割成糊状的愈伤组织出现膨大的时间稍后,约10d后才开始发生,而且有部分糊状愈伤组织出现褐化进而死亡,约20d后出现芽点,芽基部局部带红色,但芽发生的数目较少;切割分成0. 1cm片状大小的愈伤组织,表层出现突起的时间*短,约5d左右即可见,10d左右也可以见到局部带红色的芽,愈伤组织从外表上看,较前两种方式发生的要致密一些,绿色也浓厚一些,而且芽发生的数目特别多,从表1、和看,愈伤组织重和芽分化率明显优于其它两种方式,切割成糊状的愈伤则*差,大部分愈伤组织容易死亡。这一结果与杨涛、周根余等观察的安祖花愈伤组织的诱导和分化结果是一致的。从不切害J和切割成片状的表面愈伤组织的发生和分化情况来看认为从愈伤组织发生的不定芽是近表层分生细胞团产生的,为外起源,切割表层后,愈伤组织中更多的分生细胞暴露于表层,有利于细胞的分裂和芽的分化,至于切成糊状的愈伤,若按相对表面积大小来看,重和芽的分化应为*高,但试验结果却不隹尤其是愈伤组织的增重*差。可能有三个方面的原因一是被切割的愈伤组织来源于同一块愈伤组织的不同部位,很显然位于表层、中层、内层和中心位置的组织细胞的分裂和分化能力是不一样的;二是愈伤组织细胞的分裂和分化同样具有一定的群体效应,当愈伤组织块小到一定程度时,由于细胞间的相互作用消失或减弱而不利于其分裂或分化;三是由于切割时大量的愈伤组织细胞受损,亦或由于大量细胞损伤使分生细胞外环境发生改变,抑制其正常的分裂和分化。同样是切割,但结果却截然不同,*有可能的是**种,我们对同块愈伤组织不同部位进行在同样培养条件下诱导,结果证实了我们的分析,表层确实易于分化,不易死亡,越往里面越差,中心部位效果*差,大部分死亡。

切割方式对安祖花愈伤增重倍率和芽分化率的影响表1安祖花愈伤组织不同切割方式对其增殖和芽分化的影响(45d)切割方式实验批(次)净重1(g)净重2(g)净增重增重倍率平均增重倍率芽分化数(个)芽分化率(个/g)平均芽分化率(个/g)不切割成片状成糊状切割方式对安祖花愈伤增重倍率和芽分化率的影响3.2IBA对根分化的影响人们对安祖花生根的研究比较寒但大多数都集中在添加不同种类的植物生长调节剂及无机盐的浓度这两个方面,其结果较为一致的表明:添加1/2MS的无机盐有利于生根,添加适当浓度的IBA、NAA等均能诱导生根,但许多报道中,对这两种激素的浓度并未加以更具体细致的研究,而且所用培养基也较复杂,并且培养基之间也没有很好的连续性;NAA激素的使用还存在很大的问题,高浓度的NAA可强烈诱导愈伤,对植株的遗传稳定不利,有些上也报道使用NAA后,安祖花生根部分向上生长。故试验希望延续前期试验,在MS+ 1上诱导出芽的基础上,用1/2MS和不同浓度梯度的IBA寻求*快、*简便有效的方法使安祖花芽生根,为以后的大规模栽种打下基础。

从表2、和可知:在不添加激素的培养基上生根*快,一周即有根发生,但根细弱,数量少,生长慢;随着激素浓度升高,根发生时间也随之延长尤其当IBA浓度达到2 4时,根不仅很难发生,而且极易愈伤化根尖膨大、发黄,部分向上生长;在生根效率无很大差别的低浓度培养基上,我们选择0.5为*适浓度,在低浓度下,根发生快,长势好,根的形态也正常。

3.3蔗糖对根分化的影响遒表3、和表明:在没有碳源加入的培养基中,安祖花根发生迟缓,生长势很弱,植株相当矮小,随着蔗糖浓度的提高,生长势和生根情况逐渐有所好转,当达到浓度为5%时,生根效率*高,发生时间也*快,但浓度过高,如达到7%时,根的生长反而受到抑制,根变得又粗又短,而且还略带黄色、红色,并且有些根向生长说明适当浓度的蔗糖对根的发生有利。

浓度接种芽数总根数平均根数平均根长平均根径生长方向发生时间~生根~(棵)(条)(上/下)效率下部分上注生根效率=平均根数平均根长平均根径蔗糖在组织培养中一方面作为碳源和能源,另一方面又具有调节渗透压的作用。低浓度的蔗糖不足以供给组织足够的营养,而高浓度时,高渗溶液引起细胞失水长期培养会对细胞产生伤害,影响水分的吸收,从而抑制根的生长。周根余等对安祖花在不同蔗糖浓度下形成的不定芽可溶性糖含量进行测定也证实了这一点。试验中芽在高浓度的蔗糖中培养45d后,根的数目较为正常,只是后期变得粗短,说明刚开始时并不抑制其根的发生,但对其后来生长却有较大影响。

浓度接种芽数总根数平均根数平均根长平均根径生长方向发生时间左右(条)(上/下)生根效率下部分上注:生根效率=平均根数平均根长平均根径3.4室外移栽室外苗一个月后,其成活率为100%,全部成活。

4结论根据试验,通过愈伤组织可以在同一个培养基上殖和出芽,在短时期内就能迅速大量繁殖:一个安祖花顶芽通过愈伤组织切割成片状在MS+6-BA1.0+IBA0.1上诱导90d可以形成约90个芽,在1/2MS+ 5上诱导45d生根练苗即可移栽,繁殖倍率相当大,因而能够满足市场的动态需求。而且该方法愈伤的诱导、殖、出芽均在同种培养基上完成,只有在有市场需求时才接入诱导生根培养、练苗程序,简化了操作,便于规范管理。

 
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